山东富舜新材料科技有限公司座落在美丽的“泉城”济南。公司是集化学科研、开发、生产、销售、服务为一体的综合型企业。我公司拥有先进的生产设备,完善的产品检测手段和质量保证体系。我公司的员工具有较强的责任感。经过多年的发展,现已形成添加剂、阻燃剂、和化工助剂三大类上百个品种。公司本着“诚信经营、专注品质”的宗旨,参与到激烈的市场竞争中来,以好的产品质量,优惠的产品价格,令人满意的销售服务,赢得大家的支持与信赖。山东富舜新材料科技有限公司的诚信、实力和产品质量获得业界的认可。欢迎各界朋友莅临参观、指导和业务洽谈。
考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量的原理是什么
在酸性条件下,考马斯亮兰G-250染料与蛋白质疏水区结合,导致da吸收峰由465 nm 变为595 nm,同时颜色也由棕色变为蓝色,该蓝色化合物颜色的深浅与蛋白质浓度的高低成正比关系。将蛋白质样品或稀释的BSA 与Bradford试剂混合,测量在595 nm处的吸收值,在建立由一系列稀释的BSA建立的标准曲线的情况下,蛋白质的浓度可以根据标准曲线而确定。
考马斯亮蓝G-250(Coomassie brilliant blue G-250)测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。在游离状态下呈红色,da光吸收在488nm;当它与蛋白质结合后变为青色,蛋白质-色素结合物在595nm波长下有da光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比,因此可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内达到平衡,完成反应十分迅速;其结合物在室温下1h内保持稳定。
该法是1976年Bradford建立,试剂配制简单,操作简便快捷,反应非常灵敏,灵敏度比Lowry法还高4倍,可测定微克级蛋白质含量,测定蛋白质浓度范围为0~1 000μg/mL,xaio可测2.5μg/mL蛋白质,是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。
考马斯亮蓝有G250和R250两种。其中考马斯亮蓝G250由于与蛋白质的结合反应十分迅速,常用来作为蛋白质含量的测定。考马斯亮蓝R250与蛋白质反应虽然比较缓慢,但是可以被洗脱下去,所以可以用来对电泳条带染色。
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考马斯亮蓝g-250染色法测定蛋白质含量与其他方法相比有什么优缺点
蛋白质的存在影响酸碱滴定中所用某些指示剂的颜色变化,从而改变这些染料的光吸收。在些基础上发展了蛋白质染色测定方法。涉及的指示剂有甲ji橙、考马斯亮蓝、xiu甲fen绿和xiu jia酚紫。目前广泛使用的染料是考马斯亮蓝。
考马斯亮蓝G-250在酸性溶液中为棕红色,当它与蛋白质通过范德华键结合后,变为蓝色,且在蛋白质一定浓度范围内符合比尔定律,可在595nm处比色测定。2—5分钟即呈da光吸收,至少稳定1小时。在0.01—1.0 mg蛋白质/ml范围内均可。该法操作简便迅速,消耗样品量少,但不同蛋白质之间差异大,且标准曲线线性差。高浓度的Tris、EDTA、尿素、甘油、蔗糖、bing酮、硫酸铵和去污剂时测定有干扰。缓冲液浓度过高时,改变测定液pH值会影响显色。考马斯亮蓝染色能力强,比色杯不洗干净会影响光吸收值,不可用石英怀测定
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本考马斯亮蓝染色试剂盒(Commassie Blue Staining Kit)采用了经典的考马斯亮蓝染色和脱色方法,以考马斯亮蓝R250为染料,可用于SDS-PAGE或非变性PAGE等蛋白电泳凝胶的常规染色和脱色,或Western转膜后PAGE胶上残余蛋白的检测。
使用本试剂盒,采用常规染色脱色方法累计时间达到2-3小时后可以观察到蛋白条带;采用快速染色脱色方法20分钟左右即可观察到蛋白条带。观察到清晰的蛋白条带则需染色脱色更长时间。
本试剂盒中的染色液和脱色液经过改良,不含有毒的jia醇,但含有刺激性气味的yi酸。
【复合着色剂的使用】根据需要,可将本品与本公司生产的其他色泽的着色剂按适当比例配制各种不同的颜色。
在使用本公司配置号的复合食品着色剂时,应确保按本品标签上的配料提示所涉的各单色品种都在GB2760使用范围内,按所列单色着色剂的品种等比例的方法确定使用量(本使用说明列举的使用范围和使用量是指各单色品种均能使用的范围和使用量)
【使用方法】
将标准称量的本品置于容器中,逐渐加入适量温水,并不断搅拌使之完全溶解,所得溶液即可用于着色。
使用过程中应注意尽量避免或减少酸、碱、氧化剂、还原剂、金属离子、微生物等物质的不良影响,并注意避免受高温与暴晒,以防腿色或变色。
【运输及贮存】
运输时须防潮、防晒、应贮存于干燥阴凉处、贮运过程中不得与有毒、有害物质混装、混运、混放。
以上信息由专业从事食用蓝色2号批发的富舜新材料于2025/3/25 19:58:14发布
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