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考马斯亮蓝法测定蛋白质含量流程：
该方法用于大多数蛋白质的定量是比较精que的，但不适用于小分子碱性多肽的定量。如核糖核酸酶或溶菌酶。去污剂的浓度超过0．2%影响测定结果。如TritonX-100、SDS、NP-40等。
1．Bradford浓染液的配制：将100mg考马斯亮蓝G-250溶于50ml 95%乙醇，加入100ml85%的磷酸，然后，用蒸馏水补充至1000ml，此染液放4℃至少6个月保持稳定。
2．标准曲线蛋白质样本的准备：尽量使用与待测样本性质相近的蛋白质作为标准品，例如测定抗ti，可用纯化的抗ti作为标准。如果待测样本是未知的，也可用抗ti作为标准蛋白。通常在20ug—150ug/100ul之间绘制标准曲线。
3．将待测样本溶于缓冲溶液中，该缓冲溶液应与制作标准曲线的缓冲溶液相同(hao用PBS)。
4．按1：5用蒸馏水稀释浓染料结合溶液，如出现沉淀，过滤除去。
5．每个样本加5ml稀释的染料结合溶液，作用5～30min。染液与蛋白质结合后，将由红色变为蓝色，在595nm波长下测定其吸光度。注意，显色反应不得超过30min．
6．根据标准曲线计算待测样本的浓度。
亮蓝（BrilliantBlueFCF）别称为食用青色1号（日），是由邻磺酸与N-，N-（3-磺基苄基）-缩合反应后空气氧化，利用当代的生物科技做成的食用合出黑色素。亮蓝是一种人造食用染剂，外型为红蓝紫色匀称粉末状或颗粒物，有金属质感，无臭，亮蓝具备酸性染料的特点，能使动物纤维着色。溶于于水（18.7g/100mL，21℃），呈绿色光深蓝色水溶液，溶精（1.5g/100mL，95%酒精，21℃）、凡士林、丙二醇。耐光性、耐温性强。对柠檬酸钠、酒石酸、碱均平稳、颜色艳丽、调色当然、着色力好、色彩不容易受pH危害。
亮蓝，又名食用蓝色1号（日本）、食用蓝色2号，属水溶性非偶氮类着色剂。
分子式C37H34N2Na2O9S3，相对分子质量792.86。亮蓝为食用蓝色色素,属于人工合成色素,是由邻磺酸与N--N- (3-磺基苄基)-经缩合、氧化而制得的。属于偶氮类化合物。可在食品、药品、化妆品等行业中作着色剂用。食品行业中适用于糕点、糖果、饮料等的着色。 【性状】 亮蓝为有金属光泽的深紫色至青铜色颗粒或粉末，无臭。易溶于水，水溶液呈亮蓝色；可溶于乙醇、丙二醇和甘油。耐光性、耐热性、耐酸性、耐盐性和耐微生物性很好，耐碱性和耐氧化还原特性较佳。弱酸时呈青色，强酸时呈黄色，在沸腾碱液中呈紫色 。 【性能】亮蓝的色度极强，通常都是与其他食用着色剂配合使用，使用量小，在0.0005%~0.01%之间。
以上信息由专业从事亮蓝供应商的富舜新材料于2025/4/1 15:21:58发布
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